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                • 山東東達聚合物有限公司
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                阻抑聚丙烯酰胺催化蛋白質亞甲基藍褪色光度法測定痕量鉍

                發布日期:2015-04-06 14:28:54
                蛋白質
                測定痕量鉍的方法有BiI4_與羅丹明B、丁基羅丹明B、羅丹明6G[e=1.1~1.3( X105)][1]和堿性偶 氮染料(e = 9.2 X 104)[2]等生成離子締合物光度法,3-硝基苯基熒光酮法(e = 5.0 X 104)[3],二硫腙法(e = 7.9X104 )[4],碘淀粉放大法(e = 3X 105 )[5]等。近年來,相繼報道了抑制碘酸鉀氧化結晶紫(e = 1.07 X 105)[6]及溴化十六烷基三甲銨抑制H2O2氧化荔枝紅色素(e = 9.3X 105)[7]褪色光度法測定痕量鉍等,但 諸類方法的e僅達105數量級。實驗研究發現,PAM可催化蛋白質(Pro)-MB的褪色反應,而Bi)對該催 化褪色反應有顯著的抑制作用,據此建立了阻抑PAM催化Pro-MB褪色光度測定痕量鉍的新方法。此 方法的e70 =5.0 X 107 L*morucm-1,比前述各方法的e大兩個數量級,靈敏度高,且選擇性與重現性 好,用于谷物、人發和水樣中痕量鉍的測定,結果與AAS法相吻合。
                2實驗部分
                2.1試劑和儀器
                Bi)工作溶液:取Bi)基準試劑逐級稀釋為1.0 *g/L Bi圓的水溶液;0.01%( W/V)MB水溶液;1.0 g/L PAM(陽離子型,M = 300萬)水溶液;3.0 mg/L Pro(大豆純化蛋白)水溶液;試劑除了 Bi)基準級、Pro 生化試劑級外,其余均為AR級,水為二次亞沸重蒸餾水。723型分光光度計(上海第三分析儀器廠),超 級恒溫水浴鍋(±0.2°C,重慶試驗設備廠),PHS-3B精密pH計(上海雷磁儀器廠)。
                2.2 實驗方法
                往25 mL具塞比色管中準確加入適量Bi) 1.00 mL MB,1.50 mL Pro, 0.50 mL PAM,用水稀釋至刻 度,混勻,置于50±0.2°C恒溫水浴反應15 min,取出迅速用流水冷卻至室溫,用1 cm比色皿,以水作參 比,于670 nm處測量試劑空白的吸光度A0及試液的吸光度木。
                3結果與討論
                3.1測定波長
                按實驗方法用723型分光光度計掃描測定體系溶液的吸收光譜如圖1。結果表明:體系溶液均有最 大吸收峰,各峰形相似,MB的?_= 670 nm(曲線1) Pro可使MB褪色,但褪色幅度?。ㄇ€2) PAM顯 著地催化Pr〇-MB的褪色反應(曲線3) Bi)卻能抑制PAM的催化褪色反應(曲線4)且 的加入不改變MB的,故選擇?max = 670 nm作為測定Bi)含量的工作波長。此時,峰值表觀摩爾吸 光系數e6•/0=5.0x107L•mol1•cm1。
                2001-05-04 收稿;2001-09-31 接受
                3.2測定條件
                圖1吸收光譜
                Fig. 1 Absorption spectra
                1. 1.00 mL 亞甲基藍(methylene blue,MB ) 2.
                1 + 1.50 mL 蛋白質(protein,Pro ) 3. 2 + 0.50
                mL 聚丙烯酰胺(polyacrylamide,PAM ) 4.3 +
                10.0ng Bi皿。
                3.2.1試劑的濃度與用量取10 ng Bi皿,分別改變MB、Pro、 PAM的濃度或用量,按實驗方法進行單因素優選實驗。結果表 明:當 0.01% MB 1.00 mL、3.0 mg/L Pro 1.50 mL 和 1.0 g/L PAM 0.50 mL時,體系溶液的AA = (^ - A。)值最大且恒定。此時,溶 液的pH值為6.50。
                3.2.2體系的穩定性以上述試劑的濃度和用量,當控制T = 50°C,t = 15 min反應,取出待測溶液自流水冷卻至室溫始計放置 20 min后,AA值最大,且維持1.5 h不變。
                3.3動力學參數的測定
                3.3.1反應級數及速率常數4~6 min內抑制和催化反應速度 明顯加快;15 ~ 20 min內AA值最大且恒定。而在7 ~ 15 min范圍
                內,t與log(^)值呈正相關,表明該抑制催化褪色反應為一級反 A0
                應,其回歸方程為 logC^1) = - 0.02147 + 0.008430t(min),r =
                A0
                0.9997, K = 2.66 X10-4/S。
                3.3.2反應的表觀活化能實驗研究發現:在室溫下催化反應 和抑制催化反應均不顯著;在35 ~ 50C范圍內,反應速度急劇加快,且T與-log[log(^)]值呈線性關
                A0
                系,其線性擬合方程為-log[log(^)] = 1.912 X ^ X 103 -4.935, r = 0.9998,該反應的表觀活化能E = 49.22 kJ/mol。
                3.4線性范圍、檢出限和精密度
                在實驗條件下,Bi皿的含量在0.08~0.48 Pg/L內,AA值與CBM呈線性關系,其線性回歸方程為AA =1.333 X 10-4 +0.2382CBi(lll)(Pg/L),r = 0.9999。根據AA = 0.001時所測得的物質最低含量作為方法的 靈敏度,本方法的檢出限為0.004 Pg/L Bi皿。對0.004和0.40 Pg/L Bi皿分別測定11次的RSD依次為 6.4%與 2.6%。
                3.5共存離子的影響
                對0.40 Pg/L Bi皿,相對誤差! ±5%時,下列共存離子(倍)不干擾:K+、Na+、Li+、Cl-、N〇3-、Ac-、 C〇3-(2000),F-、I-、Br-、NO2-(1500),S〇4-、〇3-'S^t、S2-、P〇3- (1000),Mn2+、Sn2+、Fe2+ (600),Al3+、
                Ag+、Cd2+、Mg2+、Ca2+(300),Zn2+、Sr2+、Pb2+、Ni2+(100),Ba2+、VW)、NbW)、TaW)、Ti_、WW)、Fe3+(50),
                Cu2+、Cr3+、Cr〇2-(30),Co2+、Mo0(15),Ce_、Sn®〇(8),表明方法有較好的選擇性。
                3.6分析應用
                稱取0.5 g的人發,糯米粉、大米粉和面粉等,分別參照文獻[8’9]的方法消化,消化液經過濾、洗滌后 中和至pH = 6.50,水定容至100 mL。取適量的上述試液和水濃縮液,按實驗方法分別測定樣品中Bi皿 的含量,分析結果見表1。
                結果表明:本法的RSD為2.2% ~4.0%,回收率為97.9% ~ 103.5%。與AAS法相比校,相對誤差
                < ±3.0%,具有較好的精密度和較高的準確度。
                轉載請注明:山東東達聚合物有限公司(http://www.findingderek.com/),是專業的陰離子聚丙烯酰胺,陽離子聚丙烯酰胺,聚丙烯酰胺生產廠家,專業生產聚丙烯酰胺,陰離子聚丙烯酰胺,陽離子聚丙烯酰胺,非離子聚丙烯酰胺。擁有雄厚的技術力量,先進的生產工藝和設備。東達聚合物有限公司全體員工為海內外用戶提供高技術,高性能,高質量的聚丙烯酰胺產品。專業聚丙烯酰胺生產廠家:山東東達聚合物有限公司熱忱歡迎國內外廣大客戶合作共贏。
                 
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